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- 약동학
- In vitro screening
- in vivo ADME에 앞서 in vitro 환경에서 약물의 ADME과정을 예측하기 위한 시험법이다
- - 세포막투과도 (Caco-2 and MDCK cell permeability)
약물이 체내에 흡수 될 때 여러 가지 흡수 메커니즘을 따르게 된다. 특히, 경구 투여 시 약물의 흡수 정도는 흡수속도상수와 생체이용률과 같은 체내동태 파라미터로 예측할 수 있어 체내동태를 프로파일링 하기 위해서 필요하다. 인간대장세포에서 유래한 Caco-2 세포 또는 MDCK 세포를 이용하여 약물 투과율을 측정한다.
- - 대사 안정성 (Microsomal stability)
대사 안정성은 약물의 clearance, half-life, oral bioavaiability와 같은 pharmacokinetic parameter등에 영향을 미칠 수 있는 요인으로서 drug candidate가 지녀야 할 중요한 특성으로 간주되고 있다. 약물 대사의 주요 장기인 간에 의한 약물의 대사 정도를 in vitro 실험을 통하여 예측하는 실험으로 liver microsome 또는 hepatocyte등 metabolically active system을 사용하여 LC-MS/MS를 통해 약물의 대사 안정성을 측정한다.
- - 혈장 단백 결합율 (Plasma protein binding)
혈장은 6~8%의 단백질을 함유하며, 그 중 albumin이 약 50%로 존재하고 있다. 산성 및 중성 화합물은 주로 albumin과, 염기성 약물은 α1-glycoprotein과 lipoprotein에 가역적으로 결합하게 되며, 세포막을 통과하지 못하게 되므로 조직으로의 이행을 저해하는 주요 인자로 작용한다고 알려져 있다. RED device를 이용한 equilibrium dialysis 방법을 이용하여 plasma에 일정한 농도의 약물을 첨가하여 4시간 동안 반응시킨 후, membrane에 존재하는 결합형 약물과 membrane을 통과한 비결합형 약물을 LC-MS/MS를 이용하여 혈장단백과의 결합율을 확인한다.
- - 혈장 안정성 (Plasma stability)
혈장에서의 가수분해는 대사반응과 더불어 신약후보물질의 생체 내 빠른 clearance와 짧은 반감기 (half-life)에 영향을 미치는 요인으로서 혈장 내 안정성은 drug candidate가 지녀야 할
중요한 특성으로 간주된다. Plasma에 반응최종농도 일정한 농도의 약물을 첨가하여 37℃에서 4시간 동안 반응시킨 후, 수집하여 LC-MS/MS를 이용하여 반응 전 약물양 대비 % remaining을 측정한다.
- - CYP450 억제 시험법 (CYP inhibition)
CYP450 Screening assay는 CYP450 효소 활성 저해 정도를 측정함으로써 약물간의 상호작용을 예측할 수 있다. 1상 약물대사 효소인 CYP450 효소 중 약물대사에 중요하게 관여하는 1A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4에 대한 저해능 평가를 Luminescence assay를 이용하여 측정한다.
- - CYP450 유도 시험법 (CYP induction)
약물이 인체에 유입되면 위장관을 거쳐 간에서 CYP 효소 단백질들에 의하여 정상적인 대사를 거쳐 체외로 배출되는 과정을 거친다. 그러나, 약물에 의한 비정상적인 CYP의 발현 유도는 예측하지 못한 부작용을 유발할 수 있다. 따라서, 신약 개발과정중 약물에 의한 CYP의 발현 유도를 이해하는 것은 약물 상호작용을 최소화하기 위하여 매우 중요하다. 본 시험에서는 약물에 의한 CYP 효소들의 유도를 real-time PCR을 통하여 분석할 수 있다.
